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利用溶液中钙离子在碱性条件下能与MTB结合，生成藏青色/蓝色的复合物，加入镁离子螯合剂，去除镁离子背景干扰，通过酶标仪检测610nm处吸光度，根据公式计算出总钙含量。

• 溶血样本对检测有干扰，尽量避免采用溶血样本。
  
• 在本试剂盒条件下，建议待测样品中钙离子浓度应大于0.5mmol/L为宜，否则有可能造成检测误差。
  
• 本法能够用于自动生化分析仪终点检测法。
  
• 如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
  
• 本试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

• 制备样品：
  
  • 血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于Ca的检测。
    
  • 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于Ca的检测。
    
  • 高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的Ca，可以使用ddH2O稀释，不宜使用普通蒸馏水稀释。
    
  • 选做：样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的Ca含量。
• 配制Ca显色工作液：临用前，取Ca Assay Buffer和MTB显色液等量混合，即为Ca显色工作液，即配即用；4℃避光保存，不宜久置。
  
• Ca加样：选用经稀盐酸处理及去离子水清洁的96孔板，按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡；如果样品中的钙离子含量过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行孔。
  

  加入物(μL)	空白孔	标准孔	测定孔
  ddH2O	2.5	—	—
  钙标准(2.5mmol/L)	—	2.5	—
  待测样品	—	—	2.5
  Ca显色工作液	200	200	200

• Ca测定：混匀，室温静置，以空白孔调零，酶标仪测定标准孔、测定孔610nm处吸光度(即为A _标准，A _测定)。